产品目录

天然腔肠素是自然界中存在最丰富的一种腔肠素，也是目前应用最普遍的一种标准底物。不仅是天然水母发光蛋白复合物的发光基团，也是海肾荧光素酶和分泌型膜锚定荧光素酶（Gluc）等的作用底物。还可用于生物共振能量转移BRET，细胞或组织内的超氧阴离子和过氧化亚硝基阴离子水平（ROS）的化学发光检测。


腔肠素是在水生生物中发现的一种发光基团，是许多荧光素酶的作用底物，包括海肾荧光素酶，分泌型膜锚定荧光素酶和薮枝虫荧光素酶，和发光蛋白包括水母发光蛋白的构成之一。其作用原理是以腔肠素为底物的荧光素酶，在含分子氧的条件下，氧化腔肠素产生高能量的中间产物，在此过程发射蓝色光，光波长在450～480nm(见图1)。而甲虫（或萤火虫）荧光素/荧光素酶（FLuc）系统不同，其在含分子氧的条件下，还需要ATP和Mg²⁺的存在才能同时发光，光波长在550～570nm。正由于生物发光信号和底物的差异，RLuc常常与FLuc联合用于多重转录报告基因研究，或用作Fluc系统内萤火虫荧光素酶转染的内参。

图1．海肾荧光素酶（Rluc）催腔肠素发光的反应流程。

• 活细胞或组织的钙离子检测；
  
• 细胞或组织的超氧化物和过氧亚硝基阴离子（活性氧，ROS）化学发光检测；
  
• 基因报告基因检测；
  
• 动物活体检测；
  
• ELISA和生物发光共振能量转移（BRET）用于蛋白相互作用研究；
  
• 药物高通量筛选（HTS）。

CAS号：55779-48-1
分子式：C₂₆H₂₁N₃O₃
分子量：423.46g/mol
纯度：＞95%
外观：黄色至棕黄色结晶性粉末
溶解性：溶于甲醇或乙醇，不要溶于DMSO
保存：-20℃干燥避光保存，且保存于惰性气体内。至少一年有效。

• 腔肠素最好以完全冻干粉的状态保存在惰性气体内，密封后置于-20℃或-70℃长期避光保存。管内即使有微量空气，也会随着时间慢慢氧化腔肠素使其活性丧失。由此，不同组间的定量结果可能显得不可靠，数据可比性不高。
  
• 腔肠素不建议以储存液的形式保存，最好于实验前配制新鲜的溶液。不建议将配好的腔肠素溶液储存在-20℃或-70℃，因其具有一个高能量的二氧杂环丁酮环形结构，即使在低温条件下都会自发降解。若是必须配成液体储存液，请按照操作步骤一、腔肠素工作液制备执行。
  
• 体内动物实验，推荐使用我司特别开发和优化的注射用天然腔肠素（货号：KM0097）或注射用腔肠素h（货号：KM0096）。
  
• 商业化腔肠素的种类繁多，有天然腔肠素，以及各种腔肠素衍生物（比如，腔肠素h，腔肠素400a，腔肠素e，腔肠素f，腔肠素hcp）。它们对钙离子的亲和力，光谱特性，以及应用倾向上会有差异，详见附录1—天然腔肠素及其衍生物的光谱特性，附录2—天然腔肠素及其衍生物的应用差异选择适当的产品。

一、腔肠素工作液制备

• 相关说明
  
  • 腔肠素溶于甲醇或乙醇，不可溶于DMSO。腔肠素的水溶性相对比较低，一般情况需先将腔肠素溶于酸化的醇类溶剂配成相对高浓度的母液，然后再用水溶性缓冲液稀释到需要的工作液，现配现用。
    
  • 腔肠素在溶液中的稳定性比较低，最好于正式实验前才配制溶液（包括高浓度母液）。但若实际要求，必须保存母液，目前来说最稳定的溶剂是丙二醇，往内加入少量L-抗坏血酸，β-巯基乙醇，DTT，DTE，或少量HCl能维持其还原态。不过，还原剂可能会减低氧化腔肠素（氧化为Coelenteramide）的动力学速率。也有可能破坏荧光素酶活性。而冻存在醇类溶剂中可能引起腔肠素沉淀，实际取决于溶液浓度。当然，可通过加热50～60℃，使得沉淀重新溶解。必须确保无可见沉淀，或在实验前（特别是活体动物）离心去沉淀。
• 操作步骤
  
  • 腔肠素母液制备
    将低温保存的腔肠素粉末置于室温回温至少20min，低速离心后。往500μg天然腔肠素内加入98μL酸化的甲醇溶液（100%甲醇中含有20μL/ml 3M或者6M HCl），配制成12mM（~5mg/ml）腔肠素母液。≤-20℃（最好-80℃）分装避光保存，可能会有少量活性的丧失，约保存4周。若存放在惰性气体内科延长保存周期。
    
  • 腔肠素工作液制备
    直接用去气蒸馏水，PBS或者其他类型生理缓冲液稀释。现配现用。可直接用不含Ca²⁺/Mg²⁺的PBS将12mM的储存液稀释到2mM（~1mg/ml）的工作液，+4℃避光短暂存放。若是体外实验，需要使用前回至室温。

附录1．天然腔肠素及其衍生物的光谱特性

产品名称	货号	Em(nm)	RLC1①	Relative Intensity②	Half-rise time(ms)③
天然腔肠素	KM0051	466	1	1	6-30
腔肠素h	KM0097	466	0.75	16	6-30
腔肠素400 a	KM0094	400	/	/	/
腔肠素hcp	KM0091	445	0.65	500	2-5
腔肠素cp	KM0090	442	0.63	28	2-5
腔肠素f	KM0092	472	0.8	20	6-30
腔肠素n	KM0089	468	0.25	0.15	6-30
腔肠素e	KM0093	405& 465	0.5	4	0.15-0.3

① RLC = relative luminescence capacity:Total time-integrated emission of aequorin in saturating Ca2+relative to native aequorin = 1.0.
② Ratio of the luminescence of aequorin reconstituted with coelenterazine analog relative to native aequorin at 100 nM Ca2+.
③ Half-Rise Time:The half-rise time is the time for the luminescence signal to reach 50%of the maximum after addition of 1mM Ca2+to a standard of aequorin reconstituted with the coelenterazine analog of interest.

附录2．天然腔肠素及其衍生物的应用差异

产品名称	货号	应用特征
天然腔肠素	KM0051	应用非常广泛的标准底物。腔肠素是天然水母发光蛋白复合物的发光基团，也是海肾荧光素酶的底物。底物的快速再生比较重要的实验推荐使用天然腔肠素。 1）生物发光检测钙离子的灵敏度非常高，检测范围从0.1μM到＞100μM； 2）使用腔肠素监测报告基因表达是其主要应用； 3）其他应用包括生物共振能量转移BRET，化学发光检测细胞或组织内的超氧阴离子和过氧化亚硝基阴离子水平(ROS)。
腔肠素h	KM0097	1）腔肠素h形成的水母发光蛋白复合物比天然腔肠素复合物的光强度高10倍以上； 2）比天然腔肠素对钙离子敏感度更高； 3）也适用报告基因分析。
腔肠素400 a	KM0094	也称为DeepBlue C，是一种腔肠素衍生物，用作海肾荧光素酶Rluc的底物，发射峰约400nm。含GFP受体的BRET研究是Rluc的首选底物，因其对GFP受体的发射波干扰非常小。不可用作Gluc底物。
腔肠素hcp	KM0091	其生物发光强度最高（腔肠素hcp形成水母发光蛋白复合物的荧光强度比天然腔肠素复合物高190倍），对Ca2+反应速度快。
腔肠素cp	KM0090	腔肠素cp产生水母发光蛋白复合物的光强度是天然腔肠素复合物的15倍，且具有更快的Ca2+反应性。
腔肠素f	KM0092	腔肠素f形成的水母发光蛋白复合物的光强度是天然腔肠素复合物的20倍，最大发射波长约长8nm。具有最好的细胞渗透性。当需要具极高钙离子Ca2+灵敏度的水母发光蛋白复合物，建议用腔肠素f。
腔肠素n	KM0089	所有的腔肠素衍生物中荧光强度最弱，对Ca2+反应时间明显慢于天然腔肠素。一种非常有用的低灵敏腔肠素。
腔肠素e	KM0093	体外水母发光蛋白再生中腔肠素e的速度最高，具有双发射峰，分别为405nm和465nm，使其能在pCa 5～7范围内通过双发射峰荧光强度比率的方式测定Ca2+浓度，提高检测准确度。但由于渗透性差，不适合胞内应用。在溶液中稳定性差。

相关搜索：天然腔肠素，Coelenterazine Native，55779-48-1